РНК, генотип, anti HCV — как сдавать анализы на гепатит С

Гепатит С — заболевание печени, вызванное флавивирусом HCV (hepatitis C virus). Заражение происходит через кровь и биологические жидкости инъекционным, половым и трансплацентарным (от матери к плоду) путем.

В группе риска заражения HCV находятся люди, ведущие беспорядочные половые отношения, потребляющие инъекционные наркотические вещества, медицинские работники и пациенты, которым проводится переливание крови и другие манипуляции. Какой анализ на гепатит С нужно сдавать в первую очередь?

Гепатит HCV: что это и в чем его особенности?

Попадая в кровь, вирус гепатита HCV дает непосредственное цитопатическое действие — поражает клетки печени, там же происходит его размножение. Параллельно с поражением клеток вирус HCV вызывает аутоиммунные реакции организма (аутоиммунный тиреоидит, ревматоидный артрит и т.п.)

Особенностью HCV по сравнению с другими формами вирусной болезни печени является менее выраженная клиническая картина. В 95% случаев заболевание проходит в скрытой форме, что часто затрудняет постановку диагноза.

Какие анализы крови сдают на гепатит С?

Анализы на гепатит С — это комплекс лабораторных тестов, позволяющих определить наличие активного вируса HCV в крови.

Из-за особенностей и различной чувствительности диагностических систем невозможно верно диагностировать заболевание на основании какого-то одного из скрининговых тестов, поэтому для подтверждения наличия вируса проводится несколько исследований.

Какие анализы на гепатит С нужно сдавать?

Первичный анализ на гепатит С — это исследование сыворотки крови на присутствие антител методом иммуноферментного анализа (ИФА).

При выявлении anti-HCV требуется обязательная перепроверка результатов.

Какие еще анализы сдают на гепатит С?

Для диагностирования заболевания проводятся дополнительные анализы при гепатите С. После иммуноферментного исследования в случае позитивного ответа используется метод ПЦР. Положительный анализ на гепатит С при ПЦР показывает, что на момент проведения исследования в крови находится вирус.

Во время ПЦР проводится исследование количественных характеристик инфекции, позволяющее выявить концентрацию вируса HCV. Далее следует анализ РНК вируса гепатита С — генотипирование, на основании которого определяются индивидуальные генетические особенности возбудителя. Всего в природе насчитывается 11 генетических типов вируса HCV. Исследование РНК гепатита С позволяет выбрать тактику лечения, а также сделать предварительное заключение о результатах противовирусной терапии.

В таком случае пациент считается потенциально инфицированным, и для подтверждения наличия anti HCV гепатита С назначается развернутое исследование сыворотки методом рекомбинантного иммуноблота (recomBlot HCV).

Этот тест позволяет точно идентифицировать анти HCV гепатита С — антитела, вырабатываемые иммунной системой человека в ответ на белковые компоненты вируса. Специфические белки к нему появляются в крови на 3-4 неделе после инфицирования, поэтому информативность ИФА тестов и recomBlot HCV на этой стадии достаточно высока.

Иммуноферментные исследования крови

Иммуноферментный тест проводится на сыворотке крови, не содержащей фибрина и форменных элементов.

ИФА основывается на взаимодействии антигена с антителами, при котором содержимое пробирки меняет цвет. На основании сравнения полученного цвета сыворотки с существующей цветовой шкалой устанавливается антиген, например, возбудитель инфекционного заболевания.

Какие анализы при гепатите С относятся к ИФА?

Anti HCV

Иммуноферментный тест на Anti HCV позволяет установить факт инфицирования на основании наличия в крови иммуноглобулинов — антител к возбудителю. Белки крови anti HCV гепатита С бывают двух типов— M и G, которые обозначаются в ходе лабораторных анализов как IgG и IgM. Белки типа М вырабатываются в крови через 4-6 недель после внедрения вируса, в это время их содержание максимально. К 5-6 месяцу уровень IgM снижается, но может возрастать при реактивации заболевания. Антитела типа G обнаруживаются через 11-12 недель после заражения, их уровень достигает пика на 5-6 месяц.

Для определения маркеров HCV проводится тест на Anti-HCV total, который показывает суммарное значение наличия антител IgG и IgM. Пропорция между иммуноглобулинами этих классов также позволяет судить о характере заболевания. Преобладание IgM над IgG говорит об активности вируса, и в ходе лечения заболевания показатели соотношения антител выравниваются.

Этот тест делается на основании чувствительности реагента к белкам HCV, в ответ на которые появляются антитела. Это — структурный белок С1 и С2, а также неструктурные протеины — NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5B. Иммуноглобулины к этим протеинам могут выявляться в крови в различном соотношении и количестве.

Recomblot HCV

Рекомбинантный иммуноблот — это высокоспецифичное лабораторное исследование сыворотки крови, дающее возможность верифицировать позитивные результаты тестов на anti HCV гепатита С. Этот тест назначается для подтверждения неясных показателей ИФА.

Recomblot HCV проводится для выявления антител к С1, С2, NS3, NS4. Различные комбинации антител могут давать отрицательные, положительные, сомнительные и возможно-положительные (пограничные) результаты. Наличие антител к двум из четырех белков HCV дает основание для позитивного результата Recomblot HCV.

РНК-анализ HCV RNA методом ПЦР

Полимеразная цепная реакция — это анализ, позволяющий изучить генетический код вируса, а также установить уровень концентрации вирионов в крови. На основании результатов RNA можно выбрать способ и узнать продолжительность терапии, а также определить фактор риска передачи инфекции от одного носителя к другому.

Качественное исследование ПЦР

Качественный ПЦР — это общий показатель, который свидетельствует о наличии/отсутствии вируса в крови. Анализ проводится методом исследования сыворотки крови Real-Time PCR с разной степенью чувствительности скрининговой системы. Результат качественного анализа может быть либо позитивный («выявлено») или негативный («не выявлено»).

Количественное исследование ПЦР

Количественный ПЦР — это показатель концентрации вирионов в 1 мл биологического материала. На основании этого теста можно определить, есть ли вероятность распространения инфекции от зараженного пациента на новых носителей, а также установить методы и длительность лечения (чем выше концентрация вируса, тем интенсивнее требуются терапия с применением комбинированных противовирусных препаратов).

Генотипирование

Анализ на генотип гепатита С — это еще один важный лабораторный тест, показывающий генетические особенности вируса. Кроме 11 основных генотипов HCV известно множество субтипов вируса. Разница между генотипами обуславливает особенности протекания болезни, выбор терапии и исход лечения.

Разные генотипы имеют различную резистентность к лекарственным препаратам, а также разную продолжительность лечения. Например, гепатит С, вызванный 1-м генотипом вируса HCV, может заметно регрессировать за 48 недель, а при наличии вируса 2 и 3 генотипов болезнь при надлежащем лечении может регрессировать за 24 недели.

Норма анализов

В зависимости от типа лабораторных тестов норма анализов на гепатит С может быть в качественных и количественных показателях.

Для иммуноферментного анализа у здорового человека, никогда не болевшего гепатитом С, суммарные анти HCV гепатита С в норме должны отсутствовать (референсное значение — «не найдено»), или быть меньше 0,9 (после перенесенного заболевания в прошлом). При превышении показателя 1,0 можно сделать вывод, что вирус есть в крови пациента в настоящий момент.

Показатели гепатита С в анализах ПЦР типа выражаются в числовых значениях:

• нижний показатель нормы находится на уровне 600.000 МЕ/мл;
• среднее значение колеблется в пределах 600.000-700.000 МЕ/мл (международных единиц на 1 мл биологического материала);
• при показателях вирусной нагрузки от 800.000 МЕ/мл и выше можно говорить о повышенной концентрации HCV в крови.

Возможен ли ложноотрицательный анализ

Несмотря на высокую чувствительность скрининговой системы при исследовании сыворотки крови на антитела, вероятность ошибочных результатов тестов всегда есть.

Объясняется такой результат тем, что существует т.н. серологическое окно — временной промежуток между инфицированием HCV и появлением реакции со стороны иммунной системы (выработки антител к HCV). Если анализ крови был проведен в этот отрезок времени, то диагностическая система может дать отрицательный результат. Поэтому в медицинской практике при подозрении на гепатит С анализы рекомендуется делать несколько раз с небольшим интервалом.

Как сдавать анализ?

Чтобы сдать анализ на гепатит С и получить правдивый результат, нужно соблюдать несколько несложных правил лабораторных тестов.

1. Кровь берется из вены натощак.
2. Перед тем как сдавать тест на гепатит С, следует исключить из употребления алкоголь, жирную, жареную и копченую пищу.
3. Между приемом пищи и моментом забора крови должно пройти 8-10 часов.

Заключение

1. При подозрении на вирусное заболевание печени следует сдать анализы на гепатит С как можно скорее. Важно помнить, что это серьезное заболевание, которое при отсутствии должного лечения может вызвать цирроз печени и даже появление нетипичных клеток.
2. Пациенту важно объяснить, как называются анализы на гепатит С и что при первичных положительных результатах исследований не нужно впадать в панику.
3. Поскольку большинство иммуноферментных тестов не являются основанием для окончательной постановки диагноза гепатита С, анализы нужно сдавать несколько раз, желательно в разных лабораториях.
4. Перед тем как провериться на гепатит С, следует помнить об индивидуальных особенностях иммунной системы, которые также обуславливают нетипичные результаты анализов.